豬場血清學檢測樣品采集標準
血清學檢測,是豬場最廣泛使用的檢測方法之一.本案例中,筆者對江蘇某豬場送檢的193份血清樣進行了豬瘟抗體、豬偽狂犬gB/gE抗體、豬圓環(huán)病毒抗體、豬藍耳病毒抗體的檢測和分析.結(jié)果顯示該場后備母豬豬瘟免疫欠佳,豬偽狂犬病免疫不合格,豬藍耳病抗體水平偏高;母豬豬偽狂犬病毒感染程度較高,豬呼吸與繁殖綜合征普遍感染且抗體偏高;公豬豬圓環(huán)病毒抗體水平偏高商品豬豬瘟免疫效果不穩(wěn)定豬藍耳病感染比較普遍,且部分豬群抗體水平偏高,豬圓環(huán)病毒病免疫欠佳.結(jié)合該場免疫程序,表明該場后備母豬和商品豬的豬瘟、豬偽狂犬病免疫程序需要做適當調(diào)整;同時考慮通過測序了解本場的豬藍耳病流行毒株,以確定合適的防控方案.
豬的抗體檢測是指通過檢測豬的血清或乳汁中的抗體含量，來反映機體感染或免疫保護情況的一種方法。實驗室檢測排除檢測方法自身敏感性、穩(wěn)定性與人為操作因素的影響外，檢測結(jié)果是否對豬場有價值、準確還會受以下幾方面因素影響。
1.影響因素
1.1豬只個體差異
不同豬只個體對病原微生物感染或疫苗免疫后反應(yīng)不同，其體內(nèi)抗體滴度也有很大的差異，因此，檢測時要有足夠的樣品數(shù)量，滿足統(tǒng)計學的需求，盡量降低個體差異對檢測、分析造成的影響。
此外，豬只個體的差異還表現(xiàn)在不同胎次的母豬，對抗原反復(fù)接觸后體內(nèi)抗體滴度也存在差別，母豬按胎次采樣，可用于分析豬群對疫苗免疫麻痹性的影響之外，也可以消除個體差異對檢測結(jié)果、分析產(chǎn)生的誤差。
1.2不同抗原的性質(zhì)
抗原有兩個基本特性：抗原性和免疫原性?？乖灾缚乖c其所誘導產(chǎn)生的抗體或致敏淋巴細胞特異性結(jié)合的能力；免疫原性是指能引起免疫應(yīng)答的性能，即抗原能刺激特定的免疫細胞，使免疫細胞活化、增殖、分化，最終產(chǎn)生免疫效應(yīng)物質(zhì)抗體和致敏淋巴細胞的特性。例如：同抗原(如疫苗和野毒)有不同的免疫原性，其對免疫系統(tǒng)的刺激是不同的，雖然都是先感染再產(chǎn)生抗體(首次感染期內(nèi)一般只能檢出抗原，抗體反應(yīng)是滯后的)，但不同抗原產(chǎn)生抗體的時間是不同的。
1.3母源抗體的因素
豬只體內(nèi)不同病原微生物的母源抗體的消長規(guī)律，峰值期各有不同，進行采樣、檢測與結(jié)果分析時都應(yīng)考慮這些因素，否則，要么分析錯誤，要么成為無價值的檢測。
1.4感染或免疫后的時間
感染或免疫后產(chǎn)生的抗體有其消長規(guī)律及持續(xù)時間，這就導致感染/免疫后不同階段其抗體滴度是不同的，也會顯示出很高的離散度。因此，樣品采集時，需根據(jù)不同的目的，根據(jù)免疫時間或日齡分階段采集符合統(tǒng)計學需求的樣本。例如在偽狂犬野毒陽性豬場檢測90日齡的仔豬gE抗體為陽性的，一定是偽狂犬野毒感染嗎？偽狂犬的母源抗體持續(xù)期特別長，一般可維持至90日齡，所以如果是偽狂犬野毒陽性豬場，90日齡之前的仔豬野毒抗體陽性比例必然是比較高的，因此單純檢測是無法判斷的。
1.5免疫次數(shù)或再次感染
豬只初次接觸抗原和再次接觸抗原，其抗體產(chǎn)生的速度和滴度是顯著不同的。通過抗體滴度和免疫信息分析，可反映豬場是否存在野毒的感染。這需要建立在分階段采樣的意識上，對檢測豬群進行合理的分組。
2.采樣標準原則
綜合上述影響結(jié)果的因素，豬場樣本采集需要根據(jù)檢測目的的不同，合理的進行分組，具體要求需要考慮以下幾方面。
2.1樣本有效性
樣品數(shù)量：根據(jù)統(tǒng)計學一般規(guī)律，采樣量20頭時可信度達98%，30頭時可信度達99%，40頭時可信度達99.5%，50頭時可信度達99.9%。
對下列豬群和豬場的采樣比例做如下劃分：
(1)公豬、后備種豬>懷孕母豬>產(chǎn)房母豬＞保育、育肥豬。
(2)檢測重要性：祖代場>父母代場>商品場。
(3)在上述采樣標準的前提下，祖代場和父母代場的采樣比例需適當上浮10-20%。
2.2公豬與后備母豬的采樣
根據(jù)豬場實際情況，如果豬精自供，建議定期對全部公豬的血清進行檢測，每年采集2-3次，重點檢測PRV和PRRSV等抗體；如果是外購，建議選擇正規(guī)的廠家，并可要求出具檢測報告。
后備母豬一般在進隔離舍后(確定后備進場后疫苗的免疫時間)，隔離1個月后 (檢測馴化或被本場毒株感染情況)及混群前2周共進行3次采樣檢測，樣本的比例為15%或至少10頭；如果涉及偽狂犬陰性場引種、偽狂犬gE抗體需逐頭檢測，至少在進隔離舍后7d全部檢測完成。如果發(fā)現(xiàn)有陽性，淘汰后在混群前還需全群檢測，發(fā)現(xiàn)有g(shù)E陽性則堅決不能混群，直至連續(xù)兩次間隔7d檢測全陰性才可混群。
2.3母豬的采樣原則
母豬群根據(jù)檢測目的的不同，母豬可按以下3種方式采樣。
A.按胎次采樣
按不同胎次進行采樣，分析可得出豬場是否存在免疫抑制性因素等現(xiàn)象，分析低胎次母豬的細小、乙腦等免疫保護是否合格，評估是否存在公豬精液傳播的途徑(如偽狂犬)的影響，1年需檢測3-4次。
B.按妊娠階段采樣
該方法適用于跟胎免疫或批次化管理(根據(jù)妊娠階段免疫)的豬場檢測疫苗免疫的持續(xù)期和保護期，監(jiān)測母豬的免疫程序合理性；也適合監(jiān)測普免豬場檢測調(diào)整仔豬的免疫時間；監(jiān)測周期1年3-4次。
C.按疫苗免疫后的時間采樣
適用于普免豬場的免疫持續(xù)期檢測，分析疫苗的免疫干擾因素及免疫效果，檢測周期1年3-4次。
在對母豬進行采樣中，統(tǒng)計時詳細記錄樣本的胎次、妊娠階段及免疫時間，進行合理化的分組。為了達到統(tǒng)計學的要求，在采樣程中，適當增加樣本數(shù)量，減少因樣品因素造成誤差。
2.4仔豬的采樣原則
仔豬的采樣按照日齡和免疫時間采樣，可以用于分析母源抗體滴度(判斷首免日齡)及免疫起效期、持續(xù)期并發(fā)現(xiàn)豬場野毒感染的規(guī)律，推薦按照以下的兩種方式采樣。
A.疫苗免疫時間
該采樣方法可以持續(xù)跟蹤某種疫苗的抗體消長規(guī)律，分析疫苗免疫效果。
B.按日齡采樣
該采樣方法可以同時檢測不同階段的免疫效果，用于綜合分析疫苗或野毒感染狀況。
綜合上述，多種因素都會對血清學檢測結(jié)果、分析產(chǎn)生影響，因此我們在采集樣品時，盡量滿足以上采樣要求，使檢測結(jié)果更準確，為豬場提供更精確的服務(wù)。
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