畜禽血液樣品的采集、制備與保存方法
血液不斷地在全身流動(dòng)，參與機(jī)體的各種功能活動(dòng)，對動(dòng)物的新陳代謝以及維持內(nèi)環(huán)境和保持與外界環(huán)境間的平衡起著重要的作用。當(dāng)血液發(fā)生病理變化時(shí)，常常會影響全身的組織和器官，而組織和器官的病變又可以引起血液成分的變化，因此，血液的檢驗(yàn)在疾病的診斷中起到十分重要的作用；臨床檢驗(yàn)采用的血液樣品分為全血、血清和血漿。全血主要用于血細(xì)胞成分的檢驗(yàn)，血清和血漿主要用于大部分臨床化學(xué)檢查和免疫學(xué)檢驗(yàn)。血液樣品的采集、制備與保存是重要的前期工作，是保證正確診斷的基本條件。
1.采集部位與方法
畜禽血液樣品的采集部位和方法，與種類、檢測項(xiàng)目、試驗(yàn)方法及用血量有關(guān)，視實(shí)際情況而定。
1.1雞的采血技術(shù)
1.1.1翅靜脈采血：是常用的采血部位，翅靜脈在肘關(guān)節(jié)腹側(cè)的表面，清晰地暴露于皮膚之下，肉眼可見。采血時(shí)先拔去該部位的羽毛，抽血時(shí)，動(dòng)作輕柔緩慢，防止血管塌陷不回流，采血后略移動(dòng)皮膚輕壓即可止血；由于雞的皮膚游離性大，采血后容易形成血腫。
1.1.2心臟采血：此方法多用于進(jìn)行尸體剖檢前的血液采集檢驗(yàn)。將雞仰臥保定，針頭從V型鎖骨前端刺入，或者在靠近心臟的胸側(cè)壁刺入；心臟采血過程中，如果操作不慎，易損傷肺臟，更有慎者，引起大出血死亡。
1.1.3頸靜脈采血：雞的左側(cè)頸靜脈很細(xì)，通常右側(cè)頸靜脈采血。在皮膚上的一個(gè)無毛的溝正好是右側(cè)頸靜脈所處的位置。頸靜脈游離性大，皮膚松弛，采血后易于形成血腫。
1.2豬采血技術(shù)
1.2.1前腔靜脈采血：豬前腔靜脈是由左右兩側(cè)的頸靜脈與腋靜脈至第一對肋骨間的胸骨柄匯合形成。采血時(shí)，針頭刺入部位在與耳根和對側(cè)肩胛骨上緣連線垂直線的胸骨端處，大豬采用站立保定，小豬可以采用仰臥保定法。左側(cè)靠近膈神經(jīng)，故以右側(cè)采血為宜。
1.2.2耳靜脈采血：一般用于體格較大的豬。保定后，耳部消毒滅菌，以手指壓迫近心端耳部靜脈，使血管努張，針頭刺入血管后，動(dòng)作要輕柔，采血要緩慢，否則血液不回流使靜脈癟陷。
1.3牛的采血技術(shù)
1.3.1頸靜脈采血：將頭向一側(cè)保定，用手指壓迫頸靜脈溝處，待血管怒張后，于采血部位消毒進(jìn)針采血。
1.3.2尾靜脈采血：采血人員站立牛正后方，將牛尾向上抬起180度，在第一尾錐與第二尾錐之間的尾中線上進(jìn)針采血。此方法需要人員少，采血速度快，可以獨(dú)立操作。
1.4馬、羊的采血技術(shù)
馬、羊均采用頸靜脈采血。方法同牛的頸靜脈采血。
1.5犬、貓的采血技術(shù)
一般在后肢外側(cè)小隱靜脈或前肢內(nèi)側(cè)皮下靜脈采血，采血前由助手保定，在采血部位的近心端扎止血帶，待血管怒張后，迅速刺入采血器，松開止血帶左手固定針頭，采血力度要適當(dāng)。
2.血液樣品的處理
2.1血漿的制備：在采血器內(nèi)加入適量的抗凝劑，采血后，反復(fù)顛倒采血器，使抗凝劑與血液充分混勻，靜置或經(jīng)過離心使血細(xì)胞下沉后，上清液即為血漿。
2.2血清的制備：首先將采集的血液樣品置室溫半小時(shí)，待血液凝固后2000-3000轉(zhuǎn)/分離心5-10分鐘，上清夜即為血清；如離心后有輕微的溶血，用牙簽將血凝塊挑出，將混有紅細(xì)胞碎片的血清再次離心，用干凈吸管收集血清于干燥的指型管中，貼上標(biāo)簽備用。如血清溶血嚴(yán)重，應(yīng)剔出樣品。
2.3全血的制備：全血制備與血漿制備基本相同。供全血分析時(shí)，抗凝劑選用會直接影響化驗(yàn)結(jié)果，選用抗凝劑的原則：主要用于血液PH值和血液電解質(zhì)測定的應(yīng)選用肝素；檸主要用于血液促凝時(shí)間的測定應(yīng)選用檸檬酸鈉；主要用于血液有形成分檢查的全血應(yīng)選用EDTA；草酸鹽不能用作血小板計(jì)數(shù)和尿素、血氨、非蛋白氮等含氮物質(zhì)的檢測；
3.血液樣品的保存與運(yùn)送
采集的血液樣品如不能及時(shí)進(jìn)行檢驗(yàn)，必須做適當(dāng)?shù)奶幚恚乐蛊涑煞职l(fā)生大的變化。
通常分離到的血清與血漿樣品保存于密閉試管中，存放于4℃冰箱內(nèi)或冷凍。
全血樣品應(yīng)保存于4℃冰箱內(nèi)，檢驗(yàn)時(shí)，樣品必須達(dá)到室溫，達(dá)到室溫之后顛倒數(shù)次，使血液充分混勻后，方可檢驗(yàn)。
如果樣品能在24小時(shí)內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室，可保存于4℃環(huán)境的保溫箱內(nèi)，如果24小時(shí)內(nèi)不能抵達(dá)或有些樣品送往外地實(shí)驗(yàn)室時(shí)，樣品必須冷凍處理后，并在低溫下運(yùn)送。運(yùn)送途中防止樣品泄漏，密閉封裝并加冰袋運(yùn)送。同時(shí)要填寫詳細(xì)的樣品記錄。
4.分析：血液樣品變異因素的控制
嚴(yán)格控制血液樣品的 變異因素，是使檢測結(jié)果盡可能符合客觀情況的重要環(huán)節(jié)。因此，在采血過程中應(yīng)注意下列問題：
4.1.規(guī)定動(dòng)物的采血時(shí)間：有些血液化學(xué)成分有明顯的晝夜波動(dòng)，對采血?jiǎng)游铮瑧?yīng)在禁食12小時(shí)后采血，這樣可以將食物對血液各種成分的濃度的影響減少到最低程度。在剛進(jìn)完食動(dòng)物身上采取的血液樣品，往往出現(xiàn)血糖、甘油三酯增高，無機(jī)磷降低，麝香草酚濁度增加。進(jìn)食富含脂肪的飼料，常導(dǎo)致血清混濁而干擾很多項(xiàng)目的生化檢測。
4.2.血液樣品來源一致：動(dòng)脈血和經(jīng)脈學(xué)的化學(xué)成分略有差異，整個(gè)試驗(yàn)期間，采取的血液樣品必須一致。
4.3.防止分解：血液內(nèi)某些化學(xué)成分，離體后由于氧化酶或細(xì)菌的作用，容易分解，致其含量有所改變。所以，為了防止血液內(nèi)某些化學(xué)成分的分解，血液樣品被采集后應(yīng)立即按規(guī)定處理，及時(shí)檢測或加入適當(dāng)?shù)谋４鎰┌匆?guī)定保存。
4.4.防止氣體逸散：血液暴露于空氣中后，二氧化碳迅速逸出，并吸收氧氣提高血氧飽和度，進(jìn)而引起血漿成分的改變，因此，在采血過程中要根據(jù)檢測項(xiàng)目的需要來采取適當(dāng)?shù)牟裳绞健?/span>
4.5.防止污染：采血器及樣品容器都必須用化學(xué)處理并用重蒸餾水沖洗，防止銅、鐵等金屬離子和污染物對影響檢測結(jié)果。并且在做作蛋白結(jié)合碘測定時(shí)，禁用碘酊消毒采血部。
4.6.防止溶血：溶血可以影響許多生化檢測項(xiàng)目的結(jié)果。紅細(xì)胞破裂后釋放出的物質(zhì)與血漿中許多成分的濃度不一樣，如鈉、氯化物、鈣等在血漿中的濃度要高于紅細(xì)胞內(nèi)的濃度，應(yīng)予以防止。
4.7引起溶血原因是強(qiáng)力震蕩、離心速度過快、溫度過低或者過高、加入與血液環(huán)境不等滲液體、放置時(shí)間過長等等引起紅細(xì)胞破裂的因素。
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